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        技术文章首页 > 技术文章 详细解析细胞膜荧光探针的样本分析
        • 详细解析细胞膜荧光探针的样本分析
        • 点击次数:178 发布时间:2021-11-19
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        •   细胞膜荧光探针用于标记肌肉膜,并且通过共聚焦激光扫描显微镜观察染料可接近的膜。细胞膜完整性的丧失是由收缩活性引起的,使得内膜的DiOC18(3)染色成为可能。由此产生的染色模式引人注目,细胞膜受损的纤维很容易与未受损的细胞膜区分开来。二十八烷基羰基酞菁高氯酸盐是阳离子氧杂羰花青染料。已经在含有卵磷脂酰胆碱(PC)的水性和非水性介质以及不同性质的不同溶剂中研究了二十八烷基羰花青菁(一种阳离子氧杂羰花青染料)的吸收和荧光光谱。结果表明,在PC中,染料在地面和激发态中形成复杂的证据。染料与PC的激发态相互作用表明电子从PC转移到染料,这是由光电化学电池在光电化学电池中产生的,光电化学电池由染料和PC在水介质中组成。
           
            细胞膜荧光探针的样本分析:
            1、制备细胞膜荧光探针膜染色溶液:
            a、制备DMSO或EtOH储备溶液:储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备;
            b、准备工作溶液:将储备溶液稀释到合适的缓冲液中,如无血清培养基,HBSS或PBS,制成1至5mM的工作溶液。
           
            2、将细胞染成悬浮液:
            a、在染料工作溶液中悬浮细胞,细胞密度为1×106/mL;
            b、在37°C孵育2-20分钟,培养时间取决于细胞类型。首先孵育20分钟,然后优化以获得均匀的标记;
            c、将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟;
            d、去除上清液,轻轻地将细胞重新悬浮在预热(37°C)的生长培养基中;
            e、按步骤c和d洗涤两次。
           
            3、染色贴壁细胞:
            a、在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞;
            b、从生长培养基中取出盖玻片,去除多余的培养基。将盖玻片放在湿度箱中;
            c、将100μL染料工作溶液吸到盖玻片的角落,轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖;
            d、将盖玻片在37°C孵育2-20分钟,培养时间根据细胞类型而变化。开始孵育20分钟,然后优化以获得均匀的标记;
            e、排出染料工作溶液,用生长培养基清洗盖玻片两到三次。对于每个洗涤循环,用预热的生长培养基覆盖细胞,孵育5-10分钟,然后去除培养基。
           
            4、显微镜检测:
            a、总结了DiD,DiO,DiI,DiS和DiR滤波器组的选择。
            b、对于同时检测多种染料,可提供如下多波段滤波器组:
            ①、DiI和DiO = Omega XF52,Chroma 51004
            ②、DiI和DiD = Omega XF92,Chroma 51007
            ③、DiI,DiO和DiD = Omega XF93,Chroma 61005
           
            5、流式细胞仪检测:
            用细胞膜荧光探针标记的细胞可分别使用常规FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。
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